清道夫鱼鱼唇表皮细胞
细胞名称: 清道夫鱼鱼唇表皮细胞
种属来源: 清道夫鱼
组织来源: 长约8cm的清道夫鱼鱼唇
疾病特征: 正常原代细胞
细胞形态: 不规则细胞
生长特性: 贴壁生长
培 养 基: M199+20%FBS+1%PS生长条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%; 温度:37 ℃,
传代方法: 1:2至1:6,每周2次。
冻存条件: 90% 完全培养基+10% DMSO,液氮储存
QC检 测: 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。
特点和简介
清道夫鱼全身灰黑色、有黑白相间的花纹,体表粗糙有盾鳞,头部扁平,背鳍高耸,尾部侧扁,嘴部圆钝,口下位,有丰富的吸盘。在水族箱中常吸附在石块上、玻璃上稳定身体和吸食藻类,也寻觅底栖动物(如水蚯蚓)。属夜行性鱼类,可与健康的品种鱼混养。它并不吃鱼饲料,而是在鱼缸的底面和侧面游来游去。它游过的地方都特别的干净。清道夫的嘴像吸尘器一样,把鱼粪、绿色的植物统统吸到了肚子里。它嘴里还含着一个气泡,这个气泡里是氧气,这样就可以使它在水里的时间变长,让它可以吃到更多的“食物”了。清道夫以鱼类排泄物、海藻、细菌、饲料渣为主要食物,这也成为了它名字的由来。
接受后处理
1) 收到细胞后,请检查是否漏液 ,如果漏液,请拍照片发给我们。
2) 请先在显微镜下确认细胞生长 状态,去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。
3) 弃去T25瓶中的培养基,添加 6ml本公司附带的完全培养基。
4) 如果细胞密度达80%-90%请及 时进行细胞传代,传代培养用6ml本公司附带的完全培养基。
5) 接到细胞次日,请检查细胞是 否污染,若发现污染或疑似污染,请及时与我们取得联系。
培养操作
1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜(或将 细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。第二天换液并 检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分 变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类;
1. 细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,细胞变圆 脱 落后,加入 1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加 入血 清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。